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    WB蛋白樣本煮多久合適？

    發(fā)布時間： 2024-04-28　　點擊次數(shù)： 412次

    WB蛋白樣本煮制時間的那些事兒

    大家在進行 WB 實驗時，可能會有這樣的疑問：蛋白樣本到底煮多久合適呢？??
    通常來說，WB 蛋白樣本的煮制時間在 3-5 分鐘左右。不過，這只是一個大致的范圍哦，具體時間還得根據(jù)實際情況來調(diào)整。
    通常6孔板細胞80%以上密度，需200ul，其他按平板面積比類推。

    在煮制蛋白樣本時，有幾點需要注意哦：

    1.煮制時間不宜過長，不然可能會導(dǎo)致蛋白變性，影響后續(xù)實驗結(jié)果;

    2.煮制溫度控制在95-100°C之間為宜;

    3.煮制過程中要記得混勻樣本，確保樣本受熱均勻。

    當樣品核酸、蛋白濃度過高時，煮樣后會發(fā)現(xiàn)槍頭吸不上來，非常粘、一砣一砣的，很容易堵住槍頭。
    這時候建議兩種處理方法：
    1.再煮5min。常規(guī)煮樣時間3-5min，樣品過濃時就煮10min；
    2.如果10min煮樣后，仍然吸不起來，才適當增加buffer，繼續(xù)煮；也可以對樣品進行超聲。煮樣時間若過長，蛋白會凝固，此時已失去繼續(xù)WB的意義，請丟棄（判斷標準：出現(xiàn)明顯的蛋白沉淀和水分層）。

    如果你對煮制時間拿不準，不妨先進行預(yù)實驗，找到最恰當的煮制時間吧！


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