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NCI-H82人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(STR鑒定)

NCI-H82人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(STR鑒定)

簡(jiǎn)要描述:
NCI-H82人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(STR鑒定)該細(xì)胞系在生化和形態(tài)學(xué)上是SCLC的變種,表達(dá)神經(jīng)元特異性烯醇酶和肌酸激酶的腦同工酶。

更新時(shí)間:2024-06-26

訪(fǎng)問(wèn)量:711

廠商性質(zhì):代理商

生產(chǎn)地址:

NCI-H82人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(STR鑒定)細(xì)胞特性

1) 來(lái)源:人  來(lái)源于轉(zhuǎn)移灶:胸腔積液

2) 含量:>1x10^6  細(xì)胞數(shù) 

3) 形態(tài):上皮樣、懸浮成團(tuán)

4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)用途:僅供科研使用。


NCI-H82人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞(STR鑒定)運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1) 收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 懸浮細(xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完-全培養(yǎng)基)。

4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完-全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。                      

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備1640培養(yǎng)基                                           87%

優(yōu)質(zhì)胎牛血清                                                      10%

GlutaMAX-1谷氨酰胺                                          1%

Sodium Pyruvate丙酮酸鈉                                  1%

P/S青霉素-鏈霉素                                                1%

備注:nci-h82 細(xì)胞懸浮聚集體,細(xì)胞以非常大的聚集體生長(zhǎng),聚集體是唯1的活細(xì)胞群

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 細(xì)胞處理:

1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完-全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完-全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完-全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)胞,可以通過(guò)向培養(yǎng)瓶中添加完-全培養(yǎng)基來(lái)維持細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài),一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×10^6個(gè)/mL(不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同,)可以維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm,離心5min,棄去上清,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完-全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

下面T25瓶為例;

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱(chēng)、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過(guò)夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。



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