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豬游離血紅蛋白(F-Hb)ELISA試劑盒

豬游離血紅蛋白(F-Hb)ELISA試劑盒

簡要描述:
豬游離血紅蛋白(F-Hb)ELISA試劑盒用于測定豬全血樣本中游離血紅蛋白(F-Hb)含量。

更新時間:2024-06-26

訪問量:1231

廠商性質(zhì):代理商

生產(chǎn)地址:

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豬游離血紅蛋白(F-Hb)ELISA試劑盒

檢測范圍:0.6μg/ml -22μg/ml 

96T

使用目的: 豬游離血紅蛋白(F-Hb)ELISA試劑盒用于測定豬全血樣本中游離血紅蛋白(F-Hb)含量。 

實驗原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中豬游離血紅蛋白(F-Hb)水平。用純化的豬游離血 紅蛋白(F-Hb)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入游離血紅蛋白 (F-Hb),再與 HRP 標記的游離血紅蛋白(F-Hb)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物, 經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下 轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的游離血紅蛋白(F-Hb)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中豬游離血紅蛋白(F-Hb)濃度。

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標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融 

2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 


操作步驟 

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

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2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。 

3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。 

4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用 

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。 

6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。 

7. 溫育:操作同 3。 

8. 洗滌:操作同 5。 

9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 10 分鐘. 

10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。 

11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。


操作程序總結(jié):

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計算

以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。 


注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。 

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。 

4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD 值 大于標準品孔第一孔的 OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。 5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 

6.底物請避光保存。 

7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. 

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 

9.本試劑不同批號組分不得混用。 


保存條件及有效期 

1.試劑盒保存:;2-8℃。 

2.有效期:6 個月

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