活體動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑

in vivo Advanced 活體動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑

1. 描述 

in vivo Advanced 活體動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑可以通過(guò)靜脈注射或體內(nèi)局部組織注射的方式完成轉(zhuǎn)染過(guò)程。此外，轉(zhuǎn)染過(guò)程中總注射體積較小，致密組織可通過(guò)顯微注射來(lái)完成轉(zhuǎn)染，且轉(zhuǎn)染復(fù)合物在體內(nèi)循環(huán)時(shí)間較長(zhǎng)。DNA，siRNA 及共轉(zhuǎn)染均可用此款轉(zhuǎn)染試劑來(lái)完成轉(zhuǎn)染操作。 

2. 基本條件 

1> DNA 

濃度: 300 ng/ul - 2 μg/ul; 

溶劑: 質(zhì)粒 DNA 需溶于雙蒸水或超純水; 

內(nèi)毒素: 去內(nèi)毒素 

2> RNA 濃度: 20 μM, 40 μM, 60 μM, 80 μM 

3. 活體動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染操作步驟 

1> 轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備: 核酸和轉(zhuǎn)染試劑直接按照 1:1 混合。之后用移液器吹打混合溶液 10-15 次以充分混勻。將混合溶液于室溫環(huán)境中靜置 10-15 分鐘，轉(zhuǎn)染復(fù)合物即可制備結(jié)束。在復(fù)合物制備過(guò)程中，離心管的管壁要確保沒(méi)有液體殘留。

2> 用注射器或顯微注射針完成靜脈注射或局部組織注射操作。 

3> 注射后 3-5 天，轉(zhuǎn)染效率可達(dá)到峰值，靶基因的表達(dá)量可于此時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。

活體動(dòng)物體內(nèi)轉(zhuǎn)染注射用量

4. 注意事項(xiàng) 

1> DNA (μg) 或 20 μM siRNA (μl)與轉(zhuǎn)染試劑的比例為 1:1。 

2> 上表中 siRNA 的注射體積是針對(duì) 20 μM siRNA 的。如果 siRNA 的濃度為 40 μM，則注射體積需減半；如果 siRNA 的濃度為 80 μM，則注射體積需為表中體積的 1/4；以此類推。 

3> 進(jìn)行局部組織注射實(shí)驗(yàn)時(shí)，轉(zhuǎn)染復(fù)合物的用量為 5-10 μl/cm2。 

4> 進(jìn)行共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)時(shí)，核酸總用量應(yīng)和上表中用量一致，各種核酸用量的比例應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行調(diào)整。之后將各種核酸與轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行充分混合。 

5> 在具體實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中，核酸和轉(zhuǎn)染試劑的用量可根據(jù)上表中最大注射用量進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。