無菌操作的注意事項（2）

我們這篇文章主要講述幾個常見實驗操作的注意事項。包括：擦拭、加蓋、灼燒、移液；

01 擦拭

實驗過程中需要擦拭的對象有工作臺面、手套、瓶皿/孔板表面、耗材/器械表面。

對于工作臺面，在實驗開始前，結(jié)束后都需要試用70%乙醇擦拭，如果實驗過程中出現(xiàn)液體滴落在臺面，也需要擦拭臺面后才能繼續(xù)實驗；

對于手套，除了佩戴一次性滅菌處理過的手套外，整個實驗過程都應(yīng)間隔一段時間就擦拭手套一次；

對于瓶皿/孔板，如果實驗過程中被拿出過生物安全柜范圍以外，那么再次放回生物安全柜或培養(yǎng)箱之前，都應(yīng)該用70%乙醇進行外表面擦拭；

對于耗材/器械表面，如果是一次性耗材，觸碰了實驗臺面、或其他實驗耗材/器械/手套等的外表面，都應(yīng)該扔棄不再試用；如果是非一次性的器械，出現(xiàn)上述誤觸，則應(yīng)該立即用70%乙醇擦拭整個可能被污染的區(qū)域。

02 加蓋

對于需要反復(fù)使用的含蓋的器皿，當實驗結(jié)束后，清洗瓶蓋時，應(yīng)該注意清潔瓶蓋內(nèi)側(cè)，包括含橡膠墊的部分。

有條件的實驗室，可以在器皿蓋上蓋子后，使用70%乙醇擦拭外表面，然后再通過外層包裹錫箔紙的方式，來盡可能降低外部環(huán)境灰塵沉積在蓋子和器皿之間縫隙的現(xiàn)象。

03 灼燒

灼燒是一種可以去除顆粒性灰塵或棉絨的有效辦法，火焰也會造成附近的氣流上升，避免灰塵沉降。

但是，在生物安全柜內(nèi)，點燃酒精燈進行灼燒是不合適的。

生物安全柜工作時，會為內(nèi)部空間提供一個穩(wěn)定的層流，但酒精燈的火焰會對它產(chǎn)生干擾，進而影響內(nèi)部的無菌環(huán)境，提高了生物污染的風險。

04 移液

移液部分，我們分為小體積移液、大體積移液和溶液傾倒轉(zhuǎn)移來講解。

對于小體積移液，一般特指小于1mL的液體轉(zhuǎn)移，因為其體積小，通常需要使用移液器來操作。

而小體積的移液吸頭比較短，在吸液的過程中有可能出現(xiàn)移液器下端也進入瓶皿內(nèi)部的情況。

此時就需要特別注意，不能讓移液器碰觸到瓶皿內(nèi)壁，如果碰觸了，則應(yīng)該立即使用70%乙醇清潔移液器下端，然后才可以繼續(xù)往下進行實驗操作。

對于大體積移液，例如5/10/25mL或以上的液體轉(zhuǎn)移，可以用大量程的移液吸頭或大量程的電動移液器輔助移液。

但不管是什么體積的移液，都應(yīng)該確保吸頭或移液管的末端內(nèi)是含有棉花或透氣膠塞的，這樣可以有效避免因為移液過程中，液體吸入移液器內(nèi)部造成污染。

但由于大體積移液的液體轉(zhuǎn)移速度快、量大，有時候即使有棉花，也會出現(xiàn)液體被吸入移液器內(nèi)的現(xiàn)象，這時就只能停止實驗，或改用其他未被污染的移液器來操作了。

關(guān)于溶液傾倒，有時液體的轉(zhuǎn)移不需要特別精準，會把溶液從一個瓶內(nèi)直接倒入另一個瓶內(nèi)或管內(nèi)。

在操作時，需要注意溶液從原來的容器中倒入新的容器時，瓶口應(yīng)保持懸空，而不是直接接觸新容器的瓶口邊緣來完成液體轉(zhuǎn)移。

因為后者會容易出現(xiàn)液橋，即液體在兩個挨得很近的接觸面之間形成的水柱，這樣的水柱容易被微生物進入；同時，在傾倒的時候也要注意不要讓液體流淌在容器的外表面，因為這樣也會提高微生物污染的風險。

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