裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)

裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)用于研究腫瘤的形成、發(fā)展以及針對(duì)腫瘤的治療方法。裸鼠是一種缺乏免疫系統(tǒng)的小鼠品種，因此能夠更容易地接受移植的異種組織，比如人類腫瘤細(xì)胞。在這種實(shí)驗(yàn)中，通常會(huì)將人類腫瘤細(xì)胞注射到裸鼠的皮下組織中，形成腫瘤。然后觀察腫瘤的生長(zhǎng)情況、病理學(xué)特征以及對(duì)治療方法的反應(yīng)。

此實(shí)驗(yàn)通常用于評(píng)估潛在的抗腫瘤藥物、免疫治療方法或其他治療策略的有效性。通過(guò)在裸鼠模型中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，可以更好地理解腫瘤的生物學(xué)特性，并為臨床治療提供重要的參考依據(jù)。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.準(zhǔn)備工作：準(zhǔn)備對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的、細(xì)胞密度達(dá)80-90%左右的腫瘤細(xì)胞。

2.細(xì)胞收集：棄掉舊培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞1-2次（去除細(xì)胞中的血清），使用胰酶消化細(xì)胞，制備成細(xì)胞懸液，離心，去上清，接著用PBS或者無(wú)血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算所需的終濃度。通常皮下瘤接種時(shí)，使用的細(xì)胞量為每支1-5×106個(gè)細(xì)胞，接種體積為0.1毫升，因此細(xì)胞懸液的濃度約為1-5×107個(gè)細(xì)胞/ml。

3.裸鼠接種：用左手固定裸鼠后，在其左側(cè)腋窩處進(jìn)行皮下注射。注射時(shí)，將針頭深入皮下約1厘米，注射體積為100微升在接種過(guò)程中，應(yīng)將細(xì)胞懸液放置在冰上，以減緩細(xì)胞凋亡。

4.接種后處理：接種完成后將裸鼠放回其籠中繼續(xù)進(jìn)行飼養(yǎng)，大約1周后可以觀察到腫瘤的形成。根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，在腫瘤體積未超過(guò)1000mm3之前，需要對(duì)裸鼠進(jìn)行無(wú)痛苦死亡，并取出腫瘤進(jìn)行后續(xù)處理，如取瘤子拍照或活體成像。

如圖為裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果示例（對(duì)照組與處理組）：

注意事項(xiàng)

1.細(xì)胞在指數(shù)生長(zhǎng)階段收集非常重要，因?yàn)榧?xì)胞狀態(tài)對(duì)細(xì)胞系移植后的活力有著極大的影響。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞系在異種移植形成的腫瘤活力較差，可以考慮使用Matrigel作為注射混合物，為植入提供豐富的基質(zhì)環(huán)境。

2、在接種時(shí)，針頭應(yīng)深入皮下約1厘米，以減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出的可能性。注射時(shí)，針頭應(yīng)向前方穿行，且在注射前輕微移動(dòng)針頭，以確保針頭處于皮下。如果針頭能夠移動(dòng)，則表明它在皮下位置，否則可能在皮內(nèi)或肌肉內(nèi)。

3、注射前，一定要排去針管內(nèi)的空氣。

4、每天監(jiān)測(cè)裸鼠的存活和腫瘤生長(zhǎng)是非常重要的，通常需要測(cè)量腫瘤的最大（L）和最?。╓）長(zhǎng)度。一般來(lái)說(shuō)，大約一周左右就可以觀察到米粒大小的腫瘤。

5、細(xì)胞消化后應(yīng)立即移植到裸鼠皮下，最好在30分鐘內(nèi)完成。在過(guò)程中，將細(xì)胞懸液置于冰上以減緩細(xì)胞代謝。

6、在接種前，使用槍將細(xì)胞懸液充分吹散，以確保細(xì)胞均勻分散，防止細(xì)胞聚集并降低其存活率。

7、要注意倫理問(wèn)題，為避免腫瘤過(guò)度生長(zhǎng)，一般不建議超過(guò)1000mm³。

8、取下瘤子后，將一部分凍存于液氮中，以備將來(lái)提取蛋白質(zhì)和RNA使用；另一部分則用福爾馬林固定，用于免疫組化，免疫熒光等實(shí)驗(yàn)。

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