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    從有限的細(xì)胞中提取 RNA

    發(fā)布時(shí)間: 2023-04-21  點(diǎn)擊次數(shù): 730次

    材料與儀器

    LCM 帽子
    乙醇 糖原 RNA 提取試劑盒 超純水
    移液器

    步驟

    一、材料

    1. 緩沖液、試劑和溶液

    75% 乙醇 (超純水配制)

    糖原,5 mg/ml(Ambion,Austin,TX)

    StratageneRNA 提取試劑盒(200345,StratageneCloningSystems,LaJolla,CA),

    包括變性溶液、飽和酚 (存于 4°C)、β-巰基乙醇 (存于 4°C)、氯仿:異戊醇、

    2mol/L 乙酸鈉、異丙醇?;蛘呤褂?PicoPureRNA 分離試劑盒(KIT0202,Arcturus,

    MountainView,CA)

    DEPC 處理的超純水 (BiotecxLaboratories,Houston,TX)(4°C 儲(chǔ)存)

    2. 特殊設(shè)備

    移液器

    無(wú) RNA 酶的 1.5 ml 管子

    3. 細(xì)胞和組織

    來(lái)自方案 3 的 LCM 帽子

    二、方法

    1. 加入 200ul 變性溶液和 1.6ulβ-巰基乙醇到 0.5 ml 管子中。

    2. 將 LCM 帽子插入管子,渦旋 5s。

    3. 倒置管子孵育 5 min。

    4. 移去 LCM 帽子。這一步獲得的樣品可以在-80°C 保存 6 個(gè)月。

    5. 將溶液轉(zhuǎn)移到 1.5 ml 管子中。

    6. 加入 2ul2mol/L 的乙酸鈉,溫和混勻。

    7. 加入 220ul 水飽和的酚(底層),溫和混勻。

    8. 加入 60ul 氯仿:異戊醇,劇烈晃動(dòng)。

    9. 放于冰上 15 min。

    10.14000r/min4°C 離心 30 min。

    11. 吸上層溶液到新管子中。

    12. 加入 2ul 糖原(最終濃度 10~150ug/ml)。

    13. 加入 200ul 冷異丙醇。

    14.-80°C 過(guò)夜。


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