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    還原糖和總糖的測(cè)定

    發(fā)布時(shí)間: 2023-01-30  點(diǎn)擊次數(shù): 1613次

    原理

    各種單糖和麥芽糖是還原糖,蔗糖和淀粉是非還原糖。利用溶解度不同,可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來,再用酸水解法使沒有還原性的雙糖和多糖徹-底水解成有還原性的單糖。在堿性條件下,還原糖將3,5-二硝基水楊酸還原為3-氨基-5-硝基水楊酸(棕紅色物質(zhì)),還原糖則被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物,在一定范圍內(nèi),還原糖的量與棕紅色物質(zhì)深淺的程度呈一定的比例關(guān)系,在540nm 波長(zhǎng)下測(cè)定棕紅色物質(zhì)的消光值,查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算,便可分別求出樣品中還原糖和總糖的含量。多糖水解時(shí),在單糖殘基上加了一分子水,因而在計(jì)算中須扣除已加入的水量,測(cè)定所得的總糖量乘以0.9 即為實(shí)際的總糖量。

    材料與儀器

    步驟

    一、實(shí)驗(yàn)材料、儀器和試劑

    1、實(shí)驗(yàn)材料:面粉。

    2、儀器: (1) 25ml 血糖管或刻度試管×11;(2) 大離心管或玻璃漏斗×2;(3) 燒杯:100ml×1;(4) 三角瓶:100ml×1;(5) 容量瓶:100ml×3;(6) 刻度吸管:1ml×11、2ml×4、10ml×1;(7) 恒溫水??;(8) 沸水??;(9) 離心機(jī)(過濾法不用此設(shè)備);(10)電子天平;(11)分光光度計(jì);

    3、試劑:

    (1) 1mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液:準(zhǔn)確稱取 100 mg分析純葡萄糖(預(yù)先在 80 ℃烘至衡重),置于小燒杯中,用少量蒸餾水溶解后,定量轉(zhuǎn)移至100ml的容量瓶中,以蒸餾水定容至刻度,搖勻,冰箱中保存?zhèn)溆谩?br style="box-sizing: border-box; border: 0px solid; --tw-translate-x:0; --tw-translate-y:0; --tw-rotate:0; --tw-skew-x:0; --tw-skew-y:0; --tw-scale-x:1; --tw-scale-y:1; --tw-pan-x: ; --tw-pan-y: ; --tw-pinch-zoom: ; --tw-scroll-snap-strictness:proximity; --tw-ordinal: ; --tw-slashed-zero: ; --tw-numeric-figure: ; --tw-numeric-spacing: ; --tw-numeric-fraction: ; --tw-ring-inset: ; --tw-ring-offset-width:0px; --tw-ring-offset-color:#fff; --tw-ring-color:rgba(59,130,246,0.5); --tw-ring-offset-shadow:0 0 #0000; --tw-ring-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow-colored:0 0 #0000; --tw-blur: ; --tw-brightness: ; --tw-contrast: ; --tw-grayscale: ; --tw-hue-rotate: ; --tw-invert: ; --tw-saturate: ; --tw-sepia: ; --tw-drop-shadow: ; --tw-backdrop-blur: ; --tw-backdrop-brightness: ; --tw-backdrop-contrast: ; --tw-backdrop-grayscale: ; --tw-backdrop-hue-rotate: ; --tw-backdrop-invert: ; --tw-backdrop-opacity: ; --tw-backdrop-saturate: ; --tw-backdrop-sepia: ; font-size: 1rem !important; line-height: 1.625rem !important;"/>
    (2) 3,5-二硝基水楊酸試劑:將6.3g 3,5-二硝基水楊酸和262ml 2NNaOH 溶液,加到500ml含有185g酒石酸甲鈉的熱水溶液中,再加5g結(jié)晶酚和5g亞硫酸鈉,攪拌溶解。冷卻后加蒸餾水定容至1000ml,貯于棕色瓶中備用。

    (3) 碘-碘化鉀溶液:稱取5g碘和10g碘化鉀,溶于100ml 蒸餾水中。

    (4) 酚酞指示劑:稱取0.1g酚酞,溶于250ml 70%乙醇中。

    (5) 6NHCl

    (6) 6NNaOH

    二、操作步驟

    1、制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線:

    取7支具有25ml刻度的血糖管或試管,編號(hào),按下表所示的量,精確加入濃度為1mg/ml的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液和3,5-二硝基水楊酸試劑。


    將各管搖勻,在沸水浴中加熱5分鐘,取出后立即放入盛有冷水的燒杯中冷卻至室溫,再以蒸餾水定容至25ml刻度處,用橡皮塞塞住管口,顛倒混勻(如用大試管,則向每管加入21.5ml蒸餾水,混勻)。在540nm波長(zhǎng)下,用0號(hào)管調(diào)零,分別讀取1-6號(hào)管的消光值。以消光值為縱坐標(biāo),葡萄糖毫克數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    2、樣品中還原糖和總糖的測(cè)定:

    (1)樣品中還原糖的提?。?br style="box-sizing: border-box; border: 0px solid; --tw-translate-x:0; --tw-translate-y:0; --tw-rotate:0; --tw-skew-x:0; --tw-skew-y:0; --tw-scale-x:1; --tw-scale-y:1; --tw-pan-x: ; --tw-pan-y: ; --tw-pinch-zoom: ; --tw-scroll-snap-strictness:proximity; --tw-ordinal: ; --tw-slashed-zero: ; --tw-numeric-figure: ; --tw-numeric-spacing: ; --tw-numeric-fraction: ; --tw-ring-inset: ; --tw-ring-offset-width:0px; --tw-ring-offset-color:#fff; --tw-ring-color:rgba(59,130,246,0.5); --tw-ring-offset-shadow:0 0 #0000; --tw-ring-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow-colored:0 0 #0000; --tw-blur: ; --tw-brightness: ; --tw-contrast: ; --tw-grayscale: ; --tw-hue-rotate: ; --tw-invert: ; --tw-saturate: ; --tw-sepia: ; --tw-drop-shadow: ; --tw-backdrop-blur: ; --tw-backdrop-brightness: ; --tw-backdrop-contrast: ; --tw-backdrop-grayscale: ; --tw-backdrop-hue-rotate: ; --tw-backdrop-invert: ; --tw-backdrop-opacity: ; --tw-backdrop-saturate: ; --tw-backdrop-sepia: ; font-size: 1rem !important; line-height: 1.625rem !important;"/>
    準(zhǔn)確稱取2g食用面粉,放在100ml的燒杯中,先以少量的蒸餾水調(diào)成糊狀,然后加50ml蒸餾水,攪勻,置于50℃恒溫水浴中保溫20分鐘,使還原糖浸出。離心或過濾,用20ml蒸餾水洗殘?jiān)?,再離心或過濾,將兩次離心的上清液或?yàn)V液全部收集在100ml的容量瓶中,用蒸餾水定容至刻度,混勻,作為還原糖待測(cè)液。

    (2)樣品中非還原糖的水解和提?。?br style="box-sizing: border-box; border: 0px solid; --tw-translate-x:0; --tw-translate-y:0; --tw-rotate:0; --tw-skew-x:0; --tw-skew-y:0; --tw-scale-x:1; --tw-scale-y:1; --tw-pan-x: ; --tw-pan-y: ; --tw-pinch-zoom: ; --tw-scroll-snap-strictness:proximity; --tw-ordinal: ; --tw-slashed-zero: ; --tw-numeric-figure: ; --tw-numeric-spacing: ; --tw-numeric-fraction: ; --tw-ring-inset: ; --tw-ring-offset-width:0px; --tw-ring-offset-color:#fff; --tw-ring-color:rgba(59,130,246,0.5); --tw-ring-offset-shadow:0 0 #0000; --tw-ring-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow:0 0 #0000; --tw-shadow-colored:0 0 #0000; --tw-blur: ; --tw-brightness: ; --tw-contrast: ; --tw-grayscale: ; --tw-hue-rotate: ; --tw-invert: ; --tw-saturate: ; --tw-sepia: ; --tw-drop-shadow: ; --tw-backdrop-blur: ; --tw-backdrop-brightness: ; --tw-backdrop-contrast: ; --tw-backdrop-grayscale: ; --tw-backdrop-hue-rotate: ; --tw-backdrop-invert: ; --tw-backdrop-opacity: ; --tw-backdrop-saturate: ; --tw-backdrop-sepia: ; font-size: 1rem !important; line-height: 1.625rem !important;"/>
    準(zhǔn)確稱取1 g食用面粉,放在100ml 的三角瓶中,加入10 ml 6NHCl及15ml 蒸餾水,置于沸水浴中加熱水解30分鐘。取1~2 滴水解液于白瓷板上,加1滴碘-碘化鉀溶液,檢查水解是否完-全。如已水解完-全,則不顯藍(lán)色。待三角瓶中的水解液冷卻后,加入一滴酚酞指示劑,以6NNaOH中和至微紅,過濾,再用少量蒸餾水沖洗三角瓶及濾紙,將濾液全部收集在100ml的容量瓶中,用蒸餾水定容至刻度,混勻。精確吸取10ml定容過的水解液,移至另一100ml的容量瓶中,定容,混勻,作為總糖待測(cè)液。

    (3)顯色和比色:

    取5支25ml刻度的血糖或刻度試管,編號(hào),按下表所示的量,精確加入待測(cè)液和試劑。

    注意事項(xiàng)

    常見問題

    1、用血糖管比大試管方便。

    2、離心比過濾易得清液。

    3、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作與樣品含糖量測(cè)定應(yīng)同時(shí)進(jìn)行,一起顯色和比色


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