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    如何做好HE染色？

    發(fā)布時間： 2022-10-25　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1490次
    HE染色是組織切片最為常用的染色法之一。其中，蘇木精染液為堿性，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸表現(xiàn)為藍(lán)色；伊紅為酸性染料，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分呈現(xiàn)紅色。



    但如何保證自己每一次都能完成漂亮的染色呢？有道是老馬都可以失前蹄兒，為了讓大家對HE染色有著更清晰的認(rèn)識，小編搜集查詢了下面的內(nèi)容，希望能對大家的染色技巧有一定的提升。


    圖片
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    顏色篇


    （1）染色結(jié)果紅藍(lán)失調(diào)
    偏藍(lán)，蘇木精染色過深或伊紅染色時間太短導(dǎo)致其分化過度；偏紅，細(xì)胞核未成功染色，蘇木精染色過淺或伊紅染色過深，脫蠟不透徹也是一個原因。

    （2）細(xì)胞核染色問題
    細(xì)胞核顏色暗淡，可能原因是蘇木精染液染色時間過短或者蘇木精過度氧化失效。這種情況是可以重新染色的，只需要將組織切片放入0.01%氫氧化鈉溶液、0.5%氨水溶液、飽和的碳酸氫鈉溶液、乙醇溶液中，每個大概3-5min即可重新染色。
    細(xì)胞核顏色過深，拋開切片本身厚度問題則可能是蘇木精染色停留時間相對過長造成的，如果是過厚則需要重新制片，不是可以重新染色。

    （3）染色不均勻
    切片過厚、厚薄不一、染色液過少都會導(dǎo)致染色效果不均勻的情況。此外，脫蠟前未烘烤或脫蠟不完整也會導(dǎo)致這種情況。

    （4）染色模糊
    切片組織固定不佳，如固定不及時或深部組織未處理；脫蠟不完整；切片包埋時溫度過高，切片后烤片溫度過高時間過久；乙醇可能也會導(dǎo)致染色模糊，乙醇可能導(dǎo)致組織發(fā)硬變脆造成染色模糊。水霧殘留在組織上也會導(dǎo)致這種情況。

    （5）出現(xiàn)白色或黑色斑點(diǎn)
    黑色斑點(diǎn)可能是由于脫水不完整造成的殘留；白色斑點(diǎn)可能是烤片時間過短溫度偏低蠟并未全融化導(dǎo)致的，也可能是切片在脫蠟溶劑中停留時間相對較短導(dǎo)致。

    （6）淡染甚至無法染色
    出現(xiàn)這種情況一般是固定時使用了酸性甲醛或在甲醛中浸泡過久導(dǎo)致的。已經(jīng)固定的切片則可嘗試再次固定；已經(jīng)制好的切片可以在染色前使用5%重鉻酸鉀溶液浸泡至少半小時后用水漂洗可改善染色效果。還可以將切片放入3%硫酸鐵銨溶液中，補(bǔ)充染色媒介改善染色效果。

    圖片
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    技術(shù)篇


    （1）蘇木精
    商用染色液質(zhì)量良莠不齊，如果有條件可以自己配置。使用乙酸濃度5%-7.5%和鹽酸濃度為0.5%-1%的蘇木精溶液放置一周，即可全成熟，染色效果好，氧化膜和結(jié)晶都很少。

    （2）冰醋酸增強(qiáng)染色效果
    少量的冰醋酸（小于10%）加入到伊紅溶液中可以伊紅與胞漿蛋白質(zhì)結(jié)合增強(qiáng)染色效果；少量的冰醋酸（小于2%）可以蘇木精染色效能，方便控制染色時間。

    （3）切片脫落
    組織本身硬度較大或壞死的在染色時就易脫落；切片過厚或者切片破碎也是脫落的原因；染色過程漂洗粗暴；反藍(lán)液堿性過強(qiáng)，可以使用自來水（pH 7.5~7.8）效果可能更好；烤片時間和溫度過短過低，或過久過高，一般30 min即可。

    （4）醇性HE染液與水溶性染液
    兩種都是可以的。相對于醇性染色液體，水溶性染色比較自由，易操作，分辨度相對低一點(diǎn)。但是醇性染色液體揮發(fā)性較高，對染色技術(shù)要求較高，但是染色效果更好，分辨度更高。


     


    以上就是一些HE染色中可能出現(xiàn)的狀況或者需要大家提前注意的內(nèi)容了，分別整理為顏色篇和技術(shù)篇供大家參考，希望可以幫到大家。

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