如何培養(yǎng)大鼠平滑肌細(xì)胞？

一、  器械
顯微器械：眼科剪一把，直彎眼科鑷各一把，細(xì)結(jié)鑷一把，手術(shù)刀一把，針頭諾干
殺老鼠器械：手術(shù)剪一把，大鑷子一把，彎眼科鑷一把，組織鉗一把，50ml燒杯一個（錫紙包好）
另外：10ml離心管兩個，培養(yǎng)皿兩個，10ml的瓶子三個，小濾器兩個，硅膠板一塊，培養(yǎng)瓶蓋子諾干

二、試劑
D-HANKS液250ml，雙抗2ml（青霉素16萬U/ml鏈霉素15萬U/ml），一型膠原酶，木瓜酶，BSA。后三種加上D-HANKS配成1ml的消化液，終濃度皆為1mg/ml。無血清DMEM和含20％FBS的DMEM

三、步驟
1．  取大鼠，稱重，水合氯醛0。3ml/100g腹腔麻醉
2．  綁好大鼠，先剪開腹腔，剪斷腹部大動脈放血，后剪開胸腔，取肺
3．  放入燒杯，后移入超凈臺，置于冰盒上。以后的操作皆在冰盒上操作
4．  倒入已加雙抗的D-HANKS，清洗肺部，扯掉食管，剪掉心臟
5．  用針頭將肺固定在硅膠板上，硅膠板置于培養(yǎng)皿里
6．  用鑷子將肺的內(nèi)外膜除去，只剩下平滑肌
7．  用眼科剪將肺部剪成1－2mm的小碎塊
8．  將碎塊移入配好的消化液中，放入培養(yǎng)箱中，消化15min
9．  取出，加入無血清的DMEM，約10ml，移入離心管中
10．  980轉(zhuǎn)/min，離心10min
11．  倒掉上清，加入約1ml含20％FBS的DMEM
12．  將碎塊用滴管加入25ml的培養(yǎng)瓶里，液體不要加多，有種濕濕的感覺即可。一到兩天可以再加點(diǎn)液體
13．  大概五到七天可以爬出

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅持為生命科學(xué)研究、活體動物轉(zhuǎn)染、大規(guī)模生物生產(chǎn)、基因和細(xì)胞治療領(lǐng)域客戶，提供*細(xì)胞體內(nèi)可代謝的核酸轉(zhuǎn)染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產(chǎn)品旨在支持廣泛的細(xì)胞擴(kuò)增和生產(chǎn)，包括培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞系等，為制藥公司或者生物技術(shù)公司提供無血清細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模生產(chǎn)服務(wù)；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細(xì)胞培養(yǎng)可分解3D基質(zhì)膠產(chǎn)品；提供內(nèi)毒素≦ 1.0 EU/mL、對細(xì)胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產(chǎn)品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)，努力發(fā)展為基因治療、細(xì)胞治療的生物科技企業(yè)