羊膜腔接種

原理

雞胚接種技術(shù)的原理是用病毒（如牛痘病毒（vaccinia virus）和雞新城疫病毒（Newcastle-disease virus））接種雞胚。 牛痘病毒適宜于在絨毛尿囊膜上生長(zhǎng)，經(jīng)培養(yǎng)后，產(chǎn)生肉眼可見的白色痘皰樣病變，似小結(jié)節(jié)或白色小片云翳狀。 雞新城疫病毒適宜接種在尿囊腔和羊膜腔內(nèi)，生長(zhǎng)后，雞胚全身皮膚出現(xiàn)出血點(diǎn)，以腦后zui顯著。 雞胚培養(yǎng)法是用來(lái)培養(yǎng)某些對(duì)雞胚敏感的 動(dòng)物病毒 的一種培養(yǎng)方法，此方法可用以進(jìn)行多種病毒的分離、培養(yǎng)，毒力的滴定，中和試驗(yàn)以及抗原和疫苗的制備等。

材料與儀器

器材：

①孵卵箱

②檢卵燈、照明燈、卵杯、卵盤、雞胚開孔器

③注射器

④眼科用剪刀和攝子、酒精燈和毛細(xì)吸管

試劑：

①材料：受精雞卵最好選擇健康來(lái)亨雞受精卵，因?yàn)閬?lái)亨雞的卵殼潔白易于照視觀察，如無(wú)此卵也可選擇其他受精雞卵。用于病毒培養(yǎng)的受精雞胚，最好是來(lái)自無(wú)特定病原體雞群 。

②消毒劑（2.5％ 碘酒和 75% 酒精） 

③2％ 來(lái)蘇兒液

步驟

羊膜腔接種的基本過(guò)程可分為如下幾步：

( 1 ) 接種步驟與方法

1 ) 將 10- 12 日齡的雞胚在檢卵燈上照視，劃出氣室范圍，并在胚胎最靠近卵殼的一側(cè)做記號(hào)。

 
2 ) 用 2.5％ 碘酒及 75％ 酒精分別消毒氣室部位的蛋殼，并用開孔器在氣室頂端鉆出一約 10 mmx6 mm 的長(zhǎng)方形裂痕，注意勿鉆破殼膜 。

3) 用 2.5％ 碘酒再次消毒鉆孔區(qū)后，用滅菌的眼科小攝子除去長(zhǎng)方形卵殼和外層殼膜，并滴加滅菌液狀石蠟一滴于下層殼膜上使其透明，以便觀察胚胎的位置。

4) 將注射器刺向胚胎的騰下胸前，以針頭撥動(dòng)下顆及腿，當(dāng)進(jìn)入羊膜腔內(nèi)時(shí)，可看到雞胚隨針頭的撥動(dòng)而動(dòng)，此時(shí)可注入 0.1 -0.2 mL 病毒液。

5 ) 拔出針頭，孔區(qū)先用 2. 5％ 碘酒消毒，然后用沾有碟酒通過(guò)火焰的小塊膠布將卵殼的小窗口封住，并于 33-35 ℃ 孵卵器內(nèi)孵育 48~72 小時(shí)，此過(guò)程要保待雞胚的氣室朝上 。

(2) 解剖與收獲

1) 收獲前雞胚須置 4 ℃ 冰箱 6 小時(shí)或過(guò)夜，但不能放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（過(guò)長(zhǎng)會(huì)引起散黃）。如急于收獲亦可置－20 ℃ 冰箱 1 小時(shí)左右。預(yù)冷的目的是將雞胚凍死，使血液凝固，避免收獲時(shí)流出紅細(xì)胞，并同尿囊液中的病毒發(fā)生凝集，造成病毒滴度下降。

2) 用 2.5％ 碘酒和 75％ 酒精分別消毒氣室處的卵殼，并用滅菌剪刀剪去氣室部的卵殼，此時(shí)勿使其碎片落于未損傷的殼膜上。用無(wú)菌毛細(xì)吸管吸取尿糞液，然后左手持小攝子夾起羊膜成傘狀，右手用毛細(xì)吸管插入羊膜腔吸取羊水，平均每胚可收獲 0.5-1.0 mJ羊水。

3) 病毒通過(guò)胚胎機(jī)體后被排泄入尿囊腔，因此當(dāng)羊水過(guò)少時(shí)，可用同胚少量尿攪液沖洗羊膜腔并吸取該洗液。

注意事項(xiàng)

1. 防止污染 為了減少污染，整個(gè)過(guò)程均需無(wú)菌操作，否則雞胚一經(jīng)污染，即迅速死亡或影響病毒的培養(yǎng) 。

2. 適宜的培養(yǎng)溫度 接種過(guò)的雞胚，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)病原繁殖所需溫度，放入 33~37 °C 溫箱內(nèi)培養(yǎng) 。