細胞培養(yǎng)的小常識

細胞體內(nèi)外培養(yǎng)的差別是什么？

答：細胞離體后，失去了神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)和細胞間的相互影響，生活在缺乏動態(tài)平衡相對穩(wěn)定環(huán)境中，日久天長，易發(fā)生如下變化：分化現(xiàn)象減弱；形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時間后衰退死亡；或發(fā)生轉(zhuǎn)化獲得不死性，變成可無限生長的連續(xù)細胞系或惡性細胞系。因此，培養(yǎng)中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體，它們既保持著與體內(nèi)細胞相同的基本結(jié)構(gòu)和功能，也有一些不同于體內(nèi)細胞的性狀。實際上從細胞一旦被置于體外培養(yǎng)后，這種差異就開始發(fā)生了。

二倍體細胞有什么特點？

答：二倍體細胞的染色體組型是2n核型；貼壁依賴接觸抑制；一般可傳代培養(yǎng)50代；無致瘤性。如W1-38：正常胚肺組織人二倍體細胞系。MRC-5：從正常男性肺組織中獲得的人二倍體細胞系。 

什么是動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)？                

答：所謂動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)（large-scale culture technology）是指在人工條件下（設(shè)定pH、溫度、溶氧等），在細胞生物反應(yīng)器（bioreactor）中高密度大量培養(yǎng)動物細胞用于生產(chǎn)生物制品的技術(shù)。目前可大規(guī)模培養(yǎng)的動物細胞有雞胚、豬腎、猴腎、地鼠腎等多種原代細胞及人二倍體細胞、CHO（中華倉鼠卵巢）細胞、BHK-21、Vero細胞(非洲綠猴腎傳代細胞)等，并已成功生產(chǎn)了包括狂

犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、紅細胞生成素、單克隆抗體等產(chǎn)品。

在過去幾十年來，細胞培養(yǎng)技術(shù)經(jīng)有了很大發(fā)展，從使用轉(zhuǎn)瓶(roller bottle) 、CellCube等貼壁細胞培養(yǎng)，發(fā)展為生物反應(yīng)器（Bioreactor）進行大規(guī)模細胞培養(yǎng)。

培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？

答：一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應(yīng)該在三到四周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

細胞培養(yǎng)基偶然被凍，可否繼續(xù)使用？

答：如果細胞培養(yǎng)基偶然被凍，您應(yīng)該自然溶解培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用，如果出現(xiàn)沉淀，只能丟棄這些培養(yǎng)基

培養(yǎng)基及其它添加物和試劑可反復(fù)凍融嗎？

答：大部分添加物和試劑最多可以凍融3次，如果次數(shù)過多會將使液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

答：要冷藏?。⊥ǔＲ后w培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個月到一年。

CO2 培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔？

答：定期(至少每兩周一次) 以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。

購買之細胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形？

答：研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少，大都是因為離心過程操作上的失誤，造成細胞的物理性損傷，以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心，應(yīng)待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)

購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因？

答：研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳，原因比較復(fù)雜，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳；血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳；解凍過程錯誤；冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心；懸浮細胞誤認為死細胞；培養(yǎng)溫度使用錯誤；細胞置于–80 ℃太久等。建議嚴格參照ATCC或ECACC的標準操作規(guī)程進行細胞復(fù)蘇、凍存等工作。

冷凍保存細胞之方法？

答：冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃（30－60 分鐘）→-20℃( 30 分鐘) → -80℃（16－18 小時或隔夜）→ 液氮罐長期儲存。

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