細(xì)胞培養(yǎng)無小事——如何選擇血清？

體外培養(yǎng)的細(xì)胞直接生活在培養(yǎng)基中，因此培養(yǎng)基需要滿足細(xì)胞對營養(yǎng)成分、促生長因子、激素、滲透壓、pH等諸多方面的要求；原代提取的時候選擇如何選擇培養(yǎng)基成了關(guān)鍵的問題，此外在細(xì)胞提取的時候因血清可以模擬個體的生存環(huán)境，在提取細(xì)胞的時候血清一定不可少。

  維持細(xì)胞生長的營養(yǎng)條件一般包括以下幾個方面：氨基酸，單糖，維生素，無機(jī)離子與微量元素，此外還有促生長激素，滲透壓，pH 值，并保證在配制試劑的時候無毒無污染。

正常的培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基無非是基礎(chǔ)培養(yǎng)基加血清。血清是一個神秘的試劑，至今為止，它在細(xì)胞的生長繁殖發(fā)揮著重要甚至是難以替代的作用。

血清的主要成分:　血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等。

  血清主要作用：提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長必須的物質(zhì)。

血清的判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：好的血清應(yīng)該是透明清亮，土黃色或棕黃色，無沉淀或極少沉淀，比較粘稠。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁、不透明、含許多沉淀物，說明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性；一般血清反復(fù)凍融或者有支原體污染的時候都會出現(xiàn)血清沉淀多的情況，若血清呈棕紅色，說明血清中的血紅蛋白含量太高，取材時有溶血現(xiàn)象；如果搖晃時感覺液體稀薄，說明血清中摻入的生理鹽水太多。如果要進(jìn)一步了解血清的質(zhì)量，則應(yīng)連續(xù)培養(yǎng)某些細(xì)胞，觀察細(xì)胞生長狀況。

  質(zhì)量一般的血清在使用的時候建議滅活，即56℃30分鐘，主要是為了防止血清中的補(bǔ)體成分對細(xì)胞產(chǎn)生毒性，一般的血清不需要滅活，因為加熱也會導(dǎo)致一些刺激因子和蛋白的流失，不利于細(xì)胞的生長。

  血清一般儲存于－20℃，同時應(yīng)避免反復(fù)凍融。反復(fù)凍融會導(dǎo)致血清中的蛋白釋出，從而會沉淀增多，購買大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲存于－20℃，使用前4度慢融。不同批次的血清會有很大的差異性，為了實驗統(tǒng)一和可重復(fù)性，建議購買血清之前先索取試用裝進(jìn)行測試，選定一批后就要保留足夠使用6個月至1年的量，直至用另一批經(jīng)過預(yù)先試驗的樣品代替。